升温对人胃癌紫杉醇耐药细胞株化疗敏感性的影响

【摘要】目的：探讨紫杉醇（Paclitaxel，TAX）化疗联合热疗对胃癌TAX敏感细胞株MKN-45及TAX耐药细胞株MKN-45/TAX的影响，探讨靶向多药耐药基因1(multiple-drugresistancegene1,MDR1)的siRNA对MKN-45/TAX多药耐药性的逆转作用，为临床应用热化疗提供理论依据。方法：1、通过浓度梯度递增法建立胃癌TAX耐药细胞株，命名为MKN-45/TAX。2、采用细胞增殖试剂盒（cellcountingkit-8，CCK-8）法检测不同温度和不同TAX浓度作用下2种细胞的增殖抑制率。3、采用反转录–聚合酶链反应（reversetranscription-PCR，RT-PCR）法、蛋白质印迹（Westernblotting）法、免疫细胞化学染法检测在不同温度作用下,MKN-45/TAX和MKN-45细胞株的体外药物敏感性,多药耐药相关基因MDR1在mRNA和蛋白水平上的表达。4、采用RT-PCR检测经靶向siRNA处理前后MDR1mRNA表达水平的变化；Westernblot法检测经靶向siRNA处理前后P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的变化。5、构建介孔二氧化硅纳米颗粒负载siRNA靶向沉默MDR1基因；RT-PCR法、Westernblot法检测沉默效果。结果：l、成功建立MKN-45/TAX。2、MDR1在MKN-45/TAX中高表达而在MKN-45中低表达。3、在MKN-45及MKN-45/TAX中，随着TAX浓度的增加对化疗药物增殖抑制率增加；42℃时MKN-45/TAX对TAX化疗药物的增殖抑制率降低，而MKN-45则升高。4、转染siRNA后MDR1mRNA和P-gp的表达水平均下降。5、介孔二氧化硅纳米颗粒负载siRNA靶向沉默MDR1基因较单纯siRNA沉默效果好。结论：1、热疗本身具有杀灭肿瘤细胞的作用，联合TAX化疗可增强MKN-45/TAX对化疗的耐药性，而增强MKN-45对化疗的敏感性，其机制与MDR1表达有关。2、靶向MDRl的siRNA可逆转MKN-45/TAX细胞MDRl介导的多药耐药。3、介孔二氧化硅纳米颗粒负载siRNA靶向沉默MDR1基因可增加siRNA沉默效率。
【作者】李芳；
【导师】张学利；
【作者基本信息】苏州大学，外科学，2014，硕士
【关键词】热疗；MKN-45；MKN-45/TAX；MDR1；siRNA；耐药；

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